產(chǎn)品簡介：

三一造血人間充質(zhì)干細胞高效擴增試劑盒（CT-021）適用于在體外培養(yǎng)人臍帶、脂肪、牙髓等多種組織來源的間充質(zhì)干細胞。

產(chǎn)品特點：

· 無異源成份

· 細胞可穩(wěn)定傳代至第16代

· 無菌，無支原體，低內(nèi)毒素

· 可支持人臍帶，脂肪，牙髓，骨髓，胎盤來源間充質(zhì)干細胞的快速增殖

保存條件：

人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基與培養(yǎng)基添加劑 B 需 2-8°C 避光保存，有效期為 12 個月；培養(yǎng)基添加劑 A 需-20°C 保存，有效期 24 個月；

配制成的wan全培養(yǎng)基可于 2-8°C 條件下存放 4 周；

使用方法：

一、人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基的配制：

1. 于實驗開始時前一天，將培養(yǎng)基添加劑 A 從-20°C 冰箱中取出，置于 4°C 冰箱中直至wan全溶解；

2.在將培養(yǎng)基瓶拿進超凈臺之前，用 75%酒精對其表面進行消毒；

3.將培養(yǎng)基添加劑 A 和 B 加入到人間充質(zhì)干細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中；

4.吸取基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌瓶身內(nèi)壁，并重復(fù)操作一次，盡可能使培養(yǎng)基添加劑全部加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中；

5.輕輕搖晃基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶身，使各成分混合均勻，搖晃時，請避免氣泡產(chǎn)生。將配制好的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基置于2-8°C 保存。

二、人間充質(zhì)干細胞的復(fù)蘇：

1.準(zhǔn)備好 37°C 水??；

2.超凈臺中，取5mL 人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基于 T25 瓶中，并將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育30min；

3.超凈臺中，取10mL人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基于15mL離心管中，待用；

4.從液氮中取出凍存的人間充質(zhì)干細胞，置于-80°C冰箱中揮發(fā)管中液氮，而后迅速將凍存管置于

37°C 溫水中，并快速晃動凍存管，使其內(nèi)含物盡快融化，待凍存管內(nèi)含物融化wan全后取出；

5.在將凍存管拿進超凈臺之前，用 75%酒精對其表面進行消毒；

6.輕輕重懸細胞，并將其移入待用的裝有 10mL 人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基的 15mL 離心管里；

7.用 1mL 培養(yǎng)基再次沖洗凍存管，并將此懸液移至離心管中，輕輕吹打混勻；

8.室溫下，300g 離心 10min；

9.傾去上清，往沉淀加入 2-3mL 的人間充質(zhì)干細胞wan全培養(yǎng)基，輕輕吸打均勻；

10.從細胞培養(yǎng)箱中取出已預(yù)先孵育 30min 的 T25 瓶，吸去培養(yǎng)瓶中的液體；

11.將細胞按 0.8-1.0×104 個活細胞/cm2 的密度接種到 T25 瓶中，并加入足量的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細胞分布均勻；

12.將細胞置于 37°C，5% CO2 的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

13.第二天，更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基；

14.每隔兩天更換一次新鮮的培養(yǎng)基，直至細胞生長至 80-90%的匯合度。

三、人間充質(zhì)干細胞的傳代：

1.將 PBS，胰酶置于 37°C 水浴鍋中預(yù)熱；

2.超凈臺中，吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液；

3.輕輕加入5mL PBS于T25 瓶中，輕輕晃動洗滌細胞后吸去PBS，共洗滌兩次；

4.加入 2mL 濃度為 0.05%的胰酶，輕輕晃動，使胰酶溶液均勻覆蓋培養(yǎng)瓶底面。顯微鏡下，當(dāng)70-80%的細胞變圓時輕拍培養(yǎng)瓶，并立即加入10mL人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基進行中和。輕輕吸取瓶內(nèi)液體反復(fù)沖洗瓶底，使細胞wan全脫落；

注意：建議使用濃度為 0.05%的胰酶，并且消化時間不宜過長，以減少胰酶對干細胞的損傷。

5.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，300g離心10min；

6.小心去除上清，而后加入10mLPBS重懸細胞沉淀，并再300g離心10min；

7.小心去除上清，加入2-3mL人間充質(zhì)干細胞無血清wan全培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，按1：2或1：3的比例接種到新的T25瓶中，再次加入足量的wan全培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶，使細胞分布均勻；

8.將細胞置于 37°C，5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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